| |
Главная |
Определение клеточных маркеров методом мембранной иммунофлюоресценцииМетод мембранной иммунофлюоресценции. Необходимые условия
Мембранная иммунофлюоресценция (МИФ) используется для локализации антигенов на интактной мембране. Для визуализации антигенов применяют специфические AT, меченные (конъюгированные) красителем, флюоресцирующим при облучении светом с адекватной длиной волны. Тот же самый принцип применяется в гистологических исследованиях, но в МИФ исследуют суспензию живых клеток, что позволяет в определенной мере судить об их функции. На рисунке схематически представлена прямая и непрямая маркировка (метод двойных AT). Мембранная иммунофлюоресценция впервые была предложена Moller в 1961 г. для определения антигена Н-2 мыши, в дальнейшем этот метод нашел широкое применение для определения поверхностных мембранных иммуноглобулинов (Smlg) лимфоцитов при характеристике В-клеток. Ниже приводится описание метода применительно к SmIg лимфоцитов человека. Принцип мембранной иммунофлюоресценции (МИФ)
а — прямая мембранная иммунофлюоресценция: флюорохромированные антитела к мембранным антигенам; б — непрямая мембранная иммунофлюоресценция (метод двойных антител): на первом этапе с мембранными антигенами связываются специфические немеченые антитела, на втором этапе с антителами связываются флюорохромированные аитивидовые АС, например, антитела к γ-глобулину кролика, если первые АТ (антитело) были получены иммунизацией кроликов; в - непрямая мембранная иммунофлюоресценция, оба антитела флюорохромнрованы. |
