Главная

Получение антителообразующих лимфоцитов

В дальнейшем речь пойдет только о слиянии клеток плазмоцитомы мыши с лимфоцитами того же вида. Слияние клеток плазмоцитомы и лимфоцитов человека или крысы имеет свои особенности.

Иммунизация

Для иммунизации используют инбредные линии мышей, сингенные, по отношению к плазмоцитоме или аллогенным штаммам. В последнем случае для лучшего роста гибридных клеток после слияния следует использовать гибриды F1 мышей ВА1В/с и мышей, иммунизированных с целью выделения у них нормальных клеток селезенки. Для культивирования гибридом in vivo также необходимо использование гибридов F1. Для проведения иммунизации подходят любые схемы, стимулирующие образование выраженного гуморального иммунного ответа. Рекомендуется повторное введение антигена за 4 дня до слияния. Антиген в этом случае вводится внутрибрюшинно или внутривенно без адъюванта. Лучший эффект достигается при использовании более высоких доз антигена, чем на предыдущих стадиях иммунизации.

Получение клеток

Мышей забивают цервикальной дислокацией, извлекают в условиях стерильности селезенку и готовят суспензию отдельных клеток. Клетки селезенки трижды отмывают средой для слияния, не содержащей сыворотки. Суспензию, содержащую лимфоцитов, переносят в центрифужный стакан объемом 25 мл. Если число лимфоцитов меньше предусмотренного, то к суспензии добавляют еще 2х108 ядерных клеток селезенки.