Главная |
Агглютинация латекса. Постановка опыта на примере выявления HBs-антигенаМатериалы и оборудование. Для работы необходимы: полистироловый латекс (Випа, ГДР), стеклянные пластины, пипетки, анти-НВs-сыворотка (например, анти-НВs-γ-глобулиновая фракция (Serum und Impfstoffwerk, Дессау, ГДР), насыщенный раствор (NH4)S04, глициновый буфер, диализная лента.
К 10 мл антисыворотки (независимо от титра) добавляют по каплям при постоянном помешивании 6 мл насыщенного раствора (NH4)2OH. Осадок собирают центрифугированием и растворяют в 5 мл воды. Раствор диализируют до полного удаления сульфата аммония, доводят концентрацию белка в препарате до 20 г/л. Дальнейшая очистка, например хроматографическая, возможна, но нами не применялась. Получение HB s-АГ-латекса К 1 мл 2% анти-НВs-γ-глобулиновой фракции приливают 10 мл 1% суспензии латекса в глицин-NaCl буфере с рН 8,8; инкубируют 12 часов при 20°С, а затем еще 12 чаов при 4°С. Образующийся осадок тщательно суспендируют. Суспензию разводят глицин-NaCl буфером и при помощи латекс-позитивной контрольной сыворотки устанавливают оптимальные условия агглютинации. Как правило, наилучшее разведение суспензии составляет 1 + 4. Постановка реакции 1 каплю латексного реагента смешивают с 1 каплей исследуемой сыворотки на стеклянной пластине я покачивают ее в течение 2 минут. Оценку результатов проводят через 10—15 минут в косом, падающим снизу свете на темном фоне. Более поздняя агглютинация рассматривается как неспецифическая. Сыворотка должна быть свежей без примеси клеток. Сыворотки с высоким содержанием липидов и желчных пигментов, а также ВИЭФ-позитивные сыворотки необходимо перед реакцией разводить. |
|