| |
Главная |
Консервирование при низкой температуреНеобходимо замораживать, гибридомы как можно раньше, начиная со стадии, когда культуры развиваются в лунках объемом 2 мл, не дожидаясь получения массовой культуры. Это позволит возобновить культуру в случае ее гибели на поздних стадиях вследствие внесения инфекции. Стабильные культуры гибридом можно подвергать многократному замораживанию. В стеклянные ампулы вносят в стерильных условиях по 106 гибридных клеток, суспендированных в среде RPMI 1640 с добавлением 20% сыворотки плода коровы и диметилсульфоксида (70 г/л). После охлаждения до 4°С клетки переносят в сосуд Дьюара с сухим льдом, выдерживают их в течение 2 часов и переносят в жидкий азот. При размораживании клетки помещают в водяную баню при 37 °С, немедленно после оттаивания их переносят в центрифужную пробирку, содержащую 5 мл культуральной среды. Осажденные центрифугированием клетки снова суспендируют в среде и переносят в заранее подготовленные лунки с двухдневной культурой спленоцитов. Проводят исследование на антителообразующую способность, в зависимости от результатов которого либо выделяют массовую культуру, либо проводят реклонирование. Если гибридные клетки взяты из среды, содержащей ГТ или ГАТ, то их следует культивировать на ГТ среде. |