| |
Главная |
Приготовление питательных средРаствор Хенкса. В соответствии с прописью изготовителя 9,77 г сухого вещества растворяют в 1 л тридистиллированной воды, с помощью 1 М NaOH доводят рН до 7,4, стерилизуют фильтрованием и хранят при 4°С. Среда Игла-МЕМ. В соответствии с прописью изготовителя 10,8 г сухого вещества растворяют в 1 л тридистиллированной воды, затем к этому раствору добавляют следующие компоненты (из расчета на 1 л раствора): 8 мг глицина, 10 мг L-Ser, 12 мг L-Pro, 14 мг L-Asn, 9 мг L-Ala, 13,3 мг L-Asp, 15 мг L-Glu, 290 мг L-Geln, 110 мг пирувата натрия. После полного растворения всех компонентов рН доводят до 7,4 с помощью 1 М NaOH и фильтруют через фильтр G 5. Раствор может храниться при +4°С в течение 4—6 недель. Раствор антибиотиков. Растворяют 1 г сульфата стрептомицина и 1000000 ЕД бензилпенициллина натриевой соли в 100 мл тридистиллированной воды, стерилизуют фильтрованием, разливают по 2 мл в стерильные сосуды и хранят в замороженном состоянии. Исходный раствор в 100 раз концентрированнее рабочих растворов. Раствор 2-меркаптоэтанола. Растворяют 0,7 мл 2-меркаптоэтанола в 100 мл стерильной тридистиллированной воды; 0,25 мл полученного раствора смешивают с 24,75 мл стерильного раствора Хенкса; хранят при 4°. Концентрация исходного раствора в 20 раз выше концентрации рабочего раствора. Раствор бикарбоната натрия. По меньшей мере 1 раз в 4 недели готовят свежий раствор бикарбоната натрия в тридистиллированной воде и стерилизуют фильтрованием. Предпочтительнее готовить полную питательную среду для клеточных культур ex tempore из отдельных составляющих ее растворов. Для получения 100 мл питательной среды смешивают 82 мл среды Игла-МЕМ, 10 мл сыворотки плода коровы (конечная концентрация 10%), 5 мл раствора 2-меркаптоэтанола (конечная концентрация 0,005 %), 2 мл раствора бикарбоната натрия (конечная концентрация 0,2%). |