Главная

Получение культур клеток

Рассчитывают количество культуральной среды, необходимое для опыта, и готовят суспензию из хранящихся в ледяной бане клеток селезенки так, чтобы в 1 мл среды содержалось 107 жизнеспособных клеток. Суспензию разливают по 2 мл в стеклянные чашки Петри диаметром 50 мм. Для индукции антителообразования в ряд чашек вносят по 0,1 мл исходной суспензии ЭБ (конечная концентрация 107 эритроцитов в пробе). Эритроциты распределяют равномерно по чашке осторожными вращательными движениями.

Посев культуры клеток следует производить непрерывно, поскольку бикарбонат натрия вызывает нарастающее ощелачивание среды, а клетки селезенки очень чувствительны к колебаниям рН в щелочной области. Чашки с культурой немедленно помещают в эксикатор (он выполняет роль инкубатора), который заполняют через антибактериальный фильтр воздухом, содержащим 7,5% СО2. Стационарная газовая фаза достигается пропусканием в течение 30 с через эксикатор газовой смеси под давлением 5 атмосферы.

Описанный выше метод позволяет получать в стеклянных чашках Петри оптимальное число антител при соблюдении следующих условий: в чашку вносят 2 мл полной питательной среды; содержание—107 клеток в 1 мл, содержание антигена (эритроциты барана) —5х106 клеток в 1 мл.