Главная

Безгелевый метод

Гемолиз происходит в безгелевой среде. АОК и эритроциты смешивают в одном слое. Смесь клеток контактирует с комплементом в закрытой камере.

Установка камер. Обезжиренные предметные стекла складывают бок о бок и соединяют обоюдоклейкой лентой по-краям и по середине. Затем снимают верхний защитный слой клейкой ленты и складывают оба стекла (как страницы книги), с тем чтобы получилось их полное наложение. Образующиеся при этом двойные камеры могут быть снова легко разделены. Каждая двойная камера имеет объем около 0,15 мл.

Заполнение камер. Для прямого метода используют следующую смесь: 0,3 мл 20% суспензии ЭБ+0,1 мл свежего абсорбированного комплемента+0,5 мл среды Игла; для непрямого метода — 0,3 мл 20% суспензии ЭБ+0,1 мл свежего абсорбированного комплемента + 0,2 мл анти-Ig-сыворотки в разведении 1:40+0,4 мл среды Игла. К 0,4 мл каждой из этих смесей добавляют по 0,2 мл суспензии лимфоцитов с установленным содержанием клеточных элементов (1—10х10⁶/мл), тщательно перемешивают и вносят по 0,15 мл в камеру. Если камера заполнена не до конца, объем доводят суспензией эритроцитов. Камеры герметизируют парафином, инкубируют 1 ч при 37 °С. Подсчет зон гемолиза проводят в течение ближайших 4 ч. Для предотвращения образования пузырей воздуха в камере непосредственно перед заполнением суспензию клеток подогревают до комнатной температуры; предметные стекла должны быть безукоризненно чистыми. В этом смысле хорошо зарекомендовало себя многочасовое отмывание в проточной водопроводной воде с последующей отмывкой дистиллированной водой и абсолютным этанолом.