Главная

Обратный локальный гемолиз

Основные этапы обратного локального гемолиза (ОЛГ) представлены на рисунке:

Непрямой метод локального гемолиза для определения Ig-продуцирующнх клеток

 

В настоящее время используют преимущественно нагруженные протеином А индикаторные эритроциты барана, поскольку протеин А представляет собой более доступный продукт, чем антиглобулиновые антитела, очищенные методом аффинной хроматографии. Протеин А легче конъюгируется с ЭБ, чем антиглобулиновые антитела.

Обратный локальный гемолиз с протеином А. Протеин А из золотистого стафилококка присоединяют к эритроцитам барана при помощи хлорида хрома. Все реагенты растворяют в 0,15 М NaCl. Один объем осадка отмытых эритроцитов смешивают с одним объемом раствора протеина А (0,5 мг/мл). Прибавляют 10 объемов 2,5х10-4 М раствора CrC13*6Н2O, инкубируют 45 минут при 37°С, многократно отмывают. При постановке локального гемолиза в геле полезно последовательно инкубировать пробу с ПС и комплементом в течение 1 ч, т. е. общая продолжительность инкубации составляет 3 часа. Предварительно определяют оптимальную концентрацию ПС с целью избежать эффекта прозоны. Следует отдавать предпочтение кроличьим АС перед козьими, поскольку они эффективнее связывают протеин А и, кроме того, содержат меньше антител, не связывающих комплемент.