Главная

Определение электрофоретической подвижности

Определение относительной электрофоретической подвижности может служить для характеристики неизвестных белков. Абсолютной электрофоретической подвижностью называют действительную длину пробега исследуемого вещества, деленную на напряжение и время (размерность 10-5 см2 В-1 сек-1). Для определения нулевой точки электроэндоосмоса, которая при электрофорезе в агаровом геле не совпадает с точкой старта, используют вещества, электрически нейтральные и обладающие ограниченной диффузией (леван, декстран, цианкобаламин). В случае, если иммуноэлектрофорез протекает в геле агара, путь, пройденный молекулами белка, представляет собой результирующую величину электрокинетического потенциала и электроосмотического потока. Поэтому электрофоретическую подвижность белка получают сложением видимой электрофоретической подвижности и электроосмотической подвижности. Можно вообще не определять нулевой точки электроосмоса для изучаемого белка, если на той же пластине вместе с ним мигрируют по крайней мере два белка с известной электрофоретической подвижностью. В этом случае подвижность исследуемого белка определяется по следующей формуле:

где Ux — подвижность исследуемого белка;
Ua и Ub— подвижности известных белков;
АХ — расстояние между белками с известной и неизвестной подвижностью;
АВ — расстояние между белками с известной подвижностью.

Определение электрофоретической мобильности при иммуноэлектрофорезе

А — альбумин, Т — трансферрин, G — IgG, R — резервуар с антигеном, IS — канавка для иммунной сыворотки,
АВ — расстояние между вершинами дуг а и Т, АХ — расстояние между вершинами дуг А и G

В качестве референс-белков удобно использовать сывороточный альбумин и сывороточный трансферрин человека. Абсолютная подвижность сывороточного альбумина при рН 8,6 составляет 6,1*10-5 см2 В-1 сек-1, трансферрина — 3,1*10-5 см2 В-1 сек-1,. Относительную электрофоретическую подвижность определяют как подвижность исследуемого белка по сравнению с сывороточным альбумином. Подвижность сывороточного альбумина принимают равной 1,0.