Главная

• Аллергия
• Клиническая иммунология
• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Иммунофлюоресценция

Маркировка иммуноглобулинов
Получение антигенных субстратов
Иммунофлюоресцентный анализ
Оборудование для иммунофлюоресцентного анализа
Оценка иммунофлюоресцентных препаратов
Применение метода иммунофлюоресценции в клинической иммунологии, обнаружение аутоантител

Иммунофлюоресценция — это метод, основанный на использовании специфичности иммунологической реакции и чувствительности флюоресцентной микроскопии. В отличие от других методов маркировки постановка пробы и точная локализация иммунной реакции на поверхности клетки или ткани происходят довольно быстро. Один из компонентов иммунной реакции, как правило антитело, метится флюоресцирующим красителем (маркировка, конъюгирование). После возбуждения флюоресцирующего агента положение антигена становится доступным непосредственному наблюдению вследствие развития флюоресценции.

Принцип иммунофлюоресцентного анализа

Предложенный в 1941 г. Кунсом, этот метод после многочисленных усовершенствований прочно вошел в лабораторную практику. Метод включает следующие важные этапы:
— получение, характеристика и маркировка антисывороток;
— получение антигенного субстрата;
— проведение анализа, т. е. обработка флюоресцирующими антителами;
— микроскопический анализ флюоресценции препаратов.

В настоящее время используют преимущественно коммерческие препараты флюоресцирующих АС. Если необходимых флюоресцирующих сывороток нет, можно воспользоваться непрямым методом флюоресцентного маркирования, присоединив к исследуемому объекту антигена, к которому имеются меченые антитела. Очень редко приходится разрабатывать собственный препарат меченых флюоресцентным красителем антител. Работа с флюоресцирующими антителами, особенно оценка получаемых с их помощью результатов, требует определенных навыков. Всегда следует проводить анализ с учетом неспецифической или нежелательной специфической флюоресценции. Необходимо учитывать факторы, которые могут оказывать влияние на флюоресцентный анализ. К ним относятся:
— желательная специфическая флюоресценция: специфическое связывание меченых антител с соответствующим антигеном;
— неспецифическая флюоресценция: неспецифическое отложение флюоресцирующих конъюгатов на различных тканевых структурах, например, вследствие избытка красителя или взаимодействия меченых антител с Fc-рецепторами; включение метки в другие сывороточные белки, кроме Ig, и неспецифическое связывание этих белков, например альбумина, фибронектина, аутофлюоресценция;
— нежелательная специфическая флюоресценция: наличие перекрестных реакций или недостаточная специфичность самого конъюгата. В случае прямого иммунофлюоресцентного анализа возможно неспецифическое отложение меченых антител.

Путем соответствующего контроля (см. ниже) удается избежать ложных результатов, обусловленных присутствием посторонней иммунофлюоресценции.