| |
Главная |
Перестроенный геномный клонТем или иным из описанных выше методов был клонирован ряд перестроенных мышиных генов х. Как показал анализ нуклеотидных последовательностей, все они очень похожи по общему строению, примером которого служит структура первого полностью проанализированного гена х из миеломы МОРС 41. Ко времени клонирования этого гена уже была расшифрована химическими методами первичная структура х-цепи, секретируемой МОРС 41, и показано, что она содержит «лидер», или сигнальную последовательность, длиной в 22 аминокислоты. (Сигнальные пептиды обнаружены на N-концах всех предназначенных для секреции белков; после того как возможность секреции белка обеспечена, эти последовательности отщепляются специфическими пептидазами.) Путем сравнения аминокислотной и нуклеотидной последовательностей была установлена кодирующая область гена. Последовательность начиналась с инициирующего кодона ATG (Met) в положении —22 (остатки сигнального пептида отсчитываются в обратную сторону от точки его отщепления) и совпадала с аминокислотной последовательностью до остатка —4 (Gly). Кодон —4 между первым и вторым нуклеотидами содержал интрон в 129 нуклеотидов. После этого интро- на последовательность гена химически соответствовала определенной последовательности аминокислот сигнального пептида и всей V-области. НаС-конце гена V кодон +108 между первым и вторым нуклеотидами содержал интрон длиной 3,7 тпн, после которого шла кодирующая последовательность С-обла-сти, не прерываемая никакими интронами. Такая общая структура — короткий интрон (около 100 пн) в кодоне —4 и длинный (>1 тпн) интрон между генами F и С — была обнаружена для всех функционально перестроенных генов х, а также для генов X и Н (хотя С-области Н-цепей устроены более сложно). |