Главная

Клональный анализ координированного программирования Т-клеток

Возможность использования маркеров Ly для предсказания функции и МНС-специфичности клеток, вообще говоря, требует строгой проверки, что важно как по практическим, так и по теоретическим соображениям. Прямой подход к этой задаче может состоять в отборе Т-клеток исключительно по их фенотипу Ly, получении из них клонов и определении того, насколько соответствуют фенотипу Ly функция и антигенная специфичность этих клонов.

В большой серии таких экспериментов Т-клетки стимулировали клетками, полностью или почти полностью отличающимися от них по МНС. Т-клетки разделяли исключительно по их фенотипу и помещали в культуру для получения большого числа клонов. Более 30 таких клонов периодически исследовали в ходе 18-месячного культивирования. Те клоны, которые исходно отбирали на фенотип Ly1⁺2^- («Ly1-клоны»), более года оставались Ly1⁺2^-, а клоны, отобранные на фенотип Ly1^-2⁺ («Еу2-клоны»), на протяжении того же времени сохраняли свой фенотип.

Все Ly1-клоны выполняли индукторные функции: после стимуляции они продуцировали интерлейкин-2. Все проверенные клоны выделяли также замещающий Т-клетки фактор (фактор или факторы, вызывающие дифференцировку В-клеток).

Функция и антигенная специфичность клонов Т-клеток, отобранных по фенотипу Ly¹⁾

Фенотип				Функция		Специфичность МНС
фенотип, отобранный из СКЛ	фенотип клонов Ly, отобранных из СКЛ			выработка индуцирующих факторов	лизис клетки	класс I	класс II
	Ly 1⁺	Ly 1⁺2⁺	Ly 1^-2⁺
Ly 1⁺2^- Ly 1^-2⁺	16/16 0	0 0²⁾	0 6/6	16/16 0	0 6/6	0 6/6 4)	16/16 ³⁾ 0

     1) Из четырех независимых смешанных культур лимфоцитов (СКЛ) было получено 26 Т-клеточных клонов.
     2) Все клоны в большом количестве имели маркер Ly 2, хотя большинство клеток не экспрессировали маркер Ly1, выявляемый в иммунофлуоресцентной реакции с использованием флуоресцентного клеточного сортера; у части клеток в некоторых тестах флуоресценция превышала фон.
3) Примерно половина клонов отвечала на продукты гена I-A, а половина - на продукты гена I-Е. Специфичность определяли, блокируя реакцию моноклональными антителами к Иа и используя стимулирующие клетки из соответствующих инбредных линий мышей.
     4) Все клоны были анти-Н-2^d и обладали специфичностью к детерминантам D^d и L^d. Специфичность определяли, блокируя реакцию моноклональными антителами или по взаимодействию с клетками мутантных мышей Н-2^d.

Все Ly1-клоны были проверены на способность к лизису клеток-мишеней как по отдельности, так и в смеси друг с другом, в присутствии и в отсутствие Кон А. Даже при высоком соотношении эффекторных клеток и клеток-мишеней никакого лизиса замечено не было. В то же время все клоны Ly2 лизировали мишени, несущие соответствующие антигены класса I, и ни один из них не выделял интерлейкин-2 после стимуляции. Таким образом, тщательная проверка более чем 30 клонов в течение 16—18 месяцев их культивирования выявила полную корреляцию между фенотипом Ly и функцией. Не было обнаружено ни одного клона, который бы мог проявлять как хелперную, так и цитолитическую активность. Корреляция между фенотипом Ly и распознаванием МНС также была полной. Все клоны Ly1 распознавали продукты генов МНС класса II, а все клоны Ly2 распознавали продукты класса I.

Эти результаты подтверждают на клональном уровне обнаруженную ранее устойчивую корреляцию между маркерами Ly, МНС-специфичностью и клеточной функцией. Экспрессия Т-клетками антигенов Ly составляет часть сложной генетической программы, определяющей также функцию клетки и МНС- специфичность.

Полученные на мышиной модели результаты непосредственно касаются исследований субпопуляций Т-клеток человека. За последние несколько лет было получено большое количество антител, по-разному реагирующих с индукторными, цитолитическими и супрессорными Т-клетками человека. Некоторые из них узнают поверхностные молекулы, которые, как утверждается, являются «эволюционными аналогами» продуктов генов Ly, обнаруживаемых у мышей. Эта точка зрения требует, однако, пересмотра. Существуют достоверные данные о том, что Т-клетки человека, которые, как считается, по поверхностным антигенам аналогичны индукторным клеткам мышей (Ly1⁺2^--клеткам), способны лизировать клетки-мишени, несущие продукты генов МНС. Для проверки пригодности использования как этих, так и других поверхностных антигенов для классификации Т-клеток необходимо точно установить: а) стабильна ли экспрессия этих антигенов на каждой популяции Т-клеток и б) можно ли предсказать функции этих клеток и их специфичность в отношении продуктов МНС. Для этого необходимы клоны человеческих Т-клеток, отобранных только по экспрессии данного поверхностного антигена. Как указывалось выше, у каждого клона могут быть определены стабильность фенотипа, иммунологическая функция и МНС-специфичность. Такие тесты необходимы для развития наших представлений о механизмах Т-клеточной регуляции иммунного ответа у здоровых людей, а также у больных хроническими заболеваниями.