| |||||||||||
Главная |
Антиген-специфическая пролиферация Т-клетокНеобходимость участия макрофагов в активации иммунного ответа впервые была продемонстрирована в опытах in vitro. Доступность культуральных методов для измерения индуцируемой антигеном пролиферации Т-клеток и образования антител в смешанных культурах Т- и В-клеток позволила точнее оценить процессы, приводящие к индукции иммунного ответа. Одно из первых наблюдений, свидетельствующих о важной роли макрофагов в активации лимфоцитов, было сделано Оппенгеймом и др. Они обнаружили, что лимфоциты человека, пропущенные через колонку со стеклянными шариками (в результате чего удаляются клетки, способные прикрепляться к твердым поверхностям), не подвергаются бласт-трансформации, вызываемой такими антигенами, как стрептолизин-О, очищенный белковый компонент туберкулина или оспенная вакцина. Позднее было показано, что аутологичные, способные к прикреплению моноциты восстанавливают чувствительность к антигену лимфоцитов, пропущенных через такую колонку. При этом необходим прямой контакт лимфоцитов и макрофагов: способность макрофагов восстанавливать чувствительность культивируемых лимфоцитов терялась, если их разделяли миллипоровым фильтром. Макрофагам не свойственна иммунологическая специфичность. Выяснилось, что нормальные макрофаги, макрофаги толерантного донора и макрофаги иммунных людей функционируют одинаково хорошо. Исследования, проведенные на лимфоцитах человека, были повторены Уэлдроном и др. на морских свинках инбредных линий 2 и 13. Схематическое описание этих опытов показано на рисунке. ЛПЭ — лимфоциты перитонеального экссудата; ЛЛУ — лимфоциты лимфатических узлов. Выяснилось, что первыми клетками, связывающими антиген, в клеточной популяции из лимфоидной ткани являются именно макрофаги, и не составило труда показать, что этот первичный захват антигена макрофагами имеет важное иммунологическое значение. Макрофаги короткое время (15—60 мин) инкубировали с растворимыми белковыми антигенами, затем отмывали от несвязавшегося антигена и помещали в культуру иммунных лимфоцитов. Такие макрофаги индуцировали пролиферативный ответ, гораздо более сильный, чем тот, который наблюдался при добавлении к смешанной культуре лимфоцитов и макрофагов того количества антигена, которое было захвачено макрофагами при кратковременной инкубации. Более того, лимфоциты, аналогичным образом подвергавшиеся импульсному (кратковременному) мечению антигеном, не пролиферировали даже при добавлении к ним макрофагов. Роль макрофагов в презентации антигена иммунным Т-лимфоцитам
Этот последний эксперимент исключает возможность того, что функция макрофагов сводится к поддержанию жизнеспособности клеток. Однако он не исключает предположения о том, что прямой контакт антигена с предполагаемым рецептором Т-лимфоцита вызывает состояние толерантности. Для проверки этого предположения инкубированные с антигеном макрофаги добавляли к контрольным лимфоцитам и лимфоцитам, предварительно инкубированным с антигеном. В обеих популяциях лимфоцитов наблюдалась одинаковая степень активации синтеза ДНК; иными словами, в этих экспериментальных условиях прямой контакт с антигеном не приводил к потере чувствительности у лимфоцитов. Способность неимунных макрофагов морской свинки презентировать антиген иммунным Т-клеткам была обычно такой же, как и у макрофагов, полученных от иммунных доноров. Из этого правила обнаружилось одно исключение. Хотя очевидно, что макрофаги могут связывать антиген неиммунным специфическим путем, ясно также, что иммунные макрофаги могут связывать антиген с помощью специфических цитофильных антител, соединенных с ними через Fc-рецепторы. И действительно, оказалось, что в условиях, когда концентрация антигена ограничена, например когда инкубацию макрофагов проводят с антигеном в низкой концентрации, макрофаги иммунных доноров и макрофаги, пассивно нагруженные антиген-специфическими антителами, функционировали гораздо лучше, чем макрофаги неиммунных доноров. In vivo в физиологических условиях концентрация антигена обычно низка, и, как показывают эти опыты, связывание антигена с макрофагами через сорбированные на них антитела может быть более важным, чем неспецифическое связывание. In vitro макрофаги, связавшие антиген любым из этих способов, по всей видимости, одинаково эффективно активируют лимфоциты. Перечисленные результаты демонстрируют абсолютную необходимость участия макрофагов в активации антиген-специфических Т-клеток и показывают, что макрофаги должны быть первыми клетками в культуре, которые взаимодействуют с антигеном. Тем не менее, трудно исключить возможность прямой активации лимфоцитов антигеном. Большинство исследователей обнаруживало, что даже тщательно освобожденные от макрофагов популяции лимфоцитов хотя и слабо, но пролиферируют в ответ на высокие концентрации антигена. Хотя обычно эту остаточную активность приписывают действию небольшого количества оставшихся в культуре макрофагов, крайне трудно исключить возможность прямой активации лимфоцитов в этом случае. И хотя исследования активации долгоживущих в культуре Т-клеточных линий и гибридом, растущих в отсутствие каких-либо вспомогательных клеток, также указывают на абсолютную необходимость макрофагов для активации, опять же нельзя исключить того, что зависимость различных субпопуляций Т-лимфоцитов от макрофагов неодинакова и что метод получения долгоживущих линий способствует отбору наиболее зависимых от макрофагов субпопуляций. | ||||||||||